紙本。縱24.5厘米，橫65.5厘米。國家一級文物。

該書卷內容為王羲之寫于東晉永和九年（353）的《蘭亭序》，共28行，324字。東晉穆帝永和九年三月三日，王羲之與謝安、孫綽等41位友人在浙江紹興蘭亭“修禊”，會上各人做詩，王羲之為他們的詩寫下序文手稿。由于此手稿書法水平較高，遂成為“天下第一行書”。行文記敘了蘭亭周圍的山水之美和聚會時的歡樂之情，抒發了作者對于生死無常的感慨。比對北京故宮博物院收藏的趙孟頫行書《臨定武蘭亭序卷》（絹本，縱27.4厘米、橫102厘米）和俞和《行書臨定武蘭亭序卷》（紙本，縱26.7厘米。橫83.7厘米），其整體面貌均較為相似，其母本當屬于“定武本”系列。該書卷包首處有清代道光年間著名政治家、杭州人沈兆霖（1801—1862）八字隸書題簽：“趙吳興行書臨蘭亭真跡”，右下方有一行小楷“二百蘭亭齋神品”，旁邊是沈兆霖的題款及鈐印。

本幅后隔水有諸多跋文。首跋內容如下：“此卷松雪晚年筆，筆力精神，清勁飄逸，擬之早年，如出二手。古人云：筆隨人老。斯言也，豈欺我哉。成化十六年庚子六月大熱，偶觀此卷，揮汗書之。”末兩行間還夾雜著兩行殘句：“仿松雪書幾三十年，未能入室，懊惱……法必見多則進得眼，入心乃應之于手也。”跋文載于卞氏《式古堂書畫匯考》一書，為楊士奇書。卷上并鈐有“楊氏家藏”朱文方印、“士奇之印”朱文方印等楊氏鑒藏章。
其次是沈兆霖的一段跋文：“趙吳興臨蘭亭殆數百遍，故傳本綦夥，刻入快雪堂各本者莫論矣。以近季都下所見亦十數本，真贗雜出，工拙不同。藏者各私所好，誰與辨之？茲卷源流既確，用筆又十分清勁，自系晚年深造有得之作，宜二百蘭亭主人奉為無上神品也。南來不意有此眼福，為識數語歸之。時咸豐歲在壬子秋日，沈兆霖。”后鈐“臣沈兆霖”白文方印、“郎亭”朱文方印。

第三跋為清末安徽歙縣籍大收藏家吳云手書題識：“按卞氏書畫匯考載趙集賢臨蘭亭卷，卷首有李西涯‘子昂親筆’四篆字，后有楊士奇二跋，又有蘭亭居士跋云。昔人有評孟頫畫不如詩，詩不如字者。余觀此卷，但覺其爛漫掩映，俱入神品，蓋未敢以其言為確論云。時弘治戊申臘月十八日，蘭亭居士識。今此卷失去西涯篆書，又失去蘭亭居士跋，蓋傖父另裝贗本售人，殊可恨也。楊氏謂此卷松雪晚年，筆力精神，清勁飄逸，擬之早年，如出兩手。余謂松雪書力追晉賢，脫盡宋人蹊徑，而其生平得力，尤在蘭亭。此卷為其晚年書，已入神化之域。余學禊帖二十年，收藏石刻并名賢墨跡幾及二百種。此中甘苦，頗窺崖略。一旦得此無上神品，歡欣寶愛，寢興與俱。歐陽公曰：足我所好玩而老焉。余于是卷固與性命相終始矣。道光戊申秋日，平齋吳云記于梁溪官舍。”后鈐“吳云私印”白文方印、“平齋翰墨”白文方印。最后一行跋文是項元汴題識：“元趙松雪臨蘭亭帖、名人題識，墨林項元汴珍秘，規字號”。下鈐“項元汴印”朱文方印、“子京所藏”白文方印。